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BloodTaq DNA Polymerase是通过缺失Taq DNA Polymerase N端一段氨基酸和突变改造得到的新型DNA聚合酶。通过改造后使本制品能够全血中存在的抑制剂产生耐受作用，能够直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先对基因组进行提取和纯化。PCR产物3’端为A，可直接用于T/A克隆。

• 经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
  
• 经检测无外源核酸酶活性；
  
• PCR方法检测无宿主残余DNA；
  
• 能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
  
• 室温存放一周，无明显活性改变。

• 使用前请将BloodTaq DNA Polymerase反复颠倒至完全混匀。
  
• 将PCR薄壁管置于冰上，加入除全血外的以下试剂。
  

  组分	用量	终浓度
  BloodTaq DNA Polymerase(5U/μL)	1μL	5U
  10×BloodTaq PCR Buffer(with Mg2+)	5μL	1×
  dNTP Mix(2.5mM each)	4μL	200μM each
  Forward Primer(10μM)	2μL	0.4μM
  Reverse Primer(10μM)	2μL	0.4μM
  全血	≤10%	-
  RNase-Free water	x μL	-
  总体积	50μL	-

  注意：
  
  • 加入全血前反复上下吸打完全混匀各种试剂。
    
  • DNA模板：可以使用肝素钠、Na-EDTA、K-EDTA或柠檬酸钠处理全血。通常建议全血含量为5～10%。不推荐使用高浓度血液。对于高GC含量的模板，加入10% DMSO。
    
  • 引物：寡核苷酸引物长度通常含20～30个核苷酸，并且最好GC含量在40～60%并均匀分布于引物中。在常规的PCR反应中，引物浓度请以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。
    
  • 10×BloodTaq PCR Buffer含有30mM MgCl₂。
• 最后将全血加入管底。
  
• PCR反应条件
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	5min	1
  变性	95℃	30s	35～40
  退火	50～68℃	30s
  延伸	72℃	250～500bp/min
  终延伸	72℃	10min	1

  注意：
  
  • PCR仪于94～95℃预热，将样品放置于PCR仪上开始循环。
    
  • BloodTaq提高了冷敏感性，具备了一些热启动特性。通常可以通过在冰上配制反应成分、最后加入聚合酶以及将热循环仪预热至变性温度(95℃)后立即进行反应来避免非特异性产物的产生。
    
  • 变性温度与时间：在PCR循环前为了充分裂解血液细胞和释放/变性DNA，要求初始变性为95℃ 5分钟。
    
  • 退火温度与时间:退火时间通常为30秒～1分钟。退火温度可以低于理论退火温度（Tm）5℃开始，通过梯度PCR进行优化。
    
  • 延伸时间：延伸反应通常在72℃下进行。一般每250～500bp延伸时间为1分钟。推荐72℃ 10分钟进行最终延伸。
    
  • 通常35～40个循环可以达到最优扩增。
• 结果检测：反应结束后取5μL反应产物并加上电泳缓冲液一起电泳检测结果。